转基因检测试剂盒

GMO (Genetically Modifed Organism) Detection Kit (Real-time SYBr Based PCR Kit)

背景

转基因生物是经过重组DNA技术或遗传工程改造后的生物体。重组DNA技术或遗传工程能改变生命体的遗传物质。随着生物技术的快速发展，一些携带新的表型特征的转基因作物已经开发出来，并用于商业化的农业生产。

注意：转基因生物（GMO）检测试剂盒仅用于体外使用。

应用

转基因试剂盒是用于检测来源于各种转基因食品中的35S基因和NOS终止子基因的特异性序列。花椰菜花叶病毒35S（CaMV-35S）启动子和根癌农杆菌胭脂碱合酶基因（NOS）终止子被广泛地用于掺入转基因作物。该试剂盒采用荧光定量PCR可以快速、灵敏和特异地检测转基因。试剂盒也包含内控对照和阳性对照。

内控对照：该试剂盒配有叶绿体rbcL基因的DNA序列，可与目标序列一同扩增。它用于检测PCR扩增是否顺利，以确定当靶序列不被扩增的时候，是否是因为PCR反应的不正常。

阳性对照：样本中已知存在要扩增的模板。通常用于检查引物是否设计正确，PCR条件是否正确建立。

整个反应需要一个小时。这些快速精准的检测有助于进行下一步的决策。

原理

荧光定量PCR用于同时扩增和定量靶DNA序列。HiMedia的转基因检测系统采用SYBr Green方法，可进行准确、可靠的检测和定量。它能扩增35S启动子、NOS终止子和内控对照（rbcL基因）。

A）图1.荧光定量PCR中，SYBrGreen染料结合特异性DNA片段的示意图。

SYBr Green染料在未结合状态（变性）和结合状态（退火至延伸）之间进行循环。随着扩增的靶DNA数量增多，荧光信号强度升高。DNA延伸时，更多的染料与新合成的DNA结合。如果反应持续监测，则可实时观测到荧光强度的增长。DNA变性后，染料分子释放，荧光信号下降。

特点

1.快速简单

2.敏感和特异的结果

3.保证结果可重复

4.快速检测所有转基因序列

试剂盒组分

制备须知

1.在使用前，所有PCR组分应在冰上完全解冻（4°C）。

2.在干净的区域如生物安全柜内进行扩增反应。

3.建议使用带滤芯的吸头，以减少外来DNA模板带来的污染风险

4.提取并储存阳性对照样品（如果使用）时，将其与其他所有试剂分开，以避免污染，并且在一个单独区域中，将其添加到反应混合液中。

取样和操作样品制备

可以检查各种食物来源样品。为了制备DNA，应进行核酸纯化，可使用HiPurATM植物基因组DNA微量纯化试剂盒（货号:MB507）。

A）操作步骤

制备PCR反应混合液

每个DNA样本所需PCR试剂的量如下

6000rpm，离心大约10秒钟

将反应管放置PCR仪上，按设定程序反应（并观察Ct值）

获取结果

注意：（可选）-用户可在另一管内设阳性对照，进行PCR反应。

B. 推荐的PCR程序

1.起始变性94°C，10分钟

2.循环参数（30个循环）

变性：94°C，45秒

退火：60°C，45秒

延伸：72°C，45秒

3.最终延伸：72°C，10分钟

扩增数据

样本

Ct值

Bt棉花35S基因

17.94

17.64

无Bt棉花35S基因

N/A

N/A

图2:对Bt棉花DNA和非Bt棉花DNA的35S基因实时PCR扩增数据

图4:对Bt棉花DNA的rbcL基因实时PCR扩增数据

质量控制

HiMedia的GMO检测试剂盒每个批次都检测过是否存在内切核酸酶、外切核酸酶和非特异性DNA酶污染。也做过DNA扩增的功能检查。

故障排除指南

安全信息

转基因生物检测试剂盒（实时）仅用于实验室用途，不适用于药物、家用或其他用途。采取适当的实验室安全措施，戴上手套。

产品使用限制和保修

HiMedia保证转基因检测试剂盒（实时）的性能符合该说明书。该试剂盒的设计、出售仅用于研究和体外用途。不用于提供诊断，预防或治疗疾病的信息。

在使用产品时适当留意。 我们推荐所有使用HiMedia产品的用户遵守用于重组DNA实验的NIH指南或其他适用指南。

储存

所提供的试剂盒在-20˚C储存时的保质期为12个月。应避免PCR试剂的反复解冻和冻存，因为这可能会降低灵敏度。如果使用多次，我们建议分装，以避免反复冻融。降解样本DNA标本也可以降低检测的敏感性。 HiMedia不推荐使用在该试剂盒到期日期后使用。